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超聲細(xì)胞破碎材料與方法

返回列表 來源:未知 發(fā)布日期:2024-08-12 08:48【

1.1材料與試劑黑桑葚干:新疆和田市絲路果果特產(chǎn);石油醚(沸程30~60℃)、三氯甲烷、正丁醇、95%乙醇:分析純,天津市德恩化學(xué)試劑有限公司。

 

1.2儀器與設(shè)備超聲波細(xì)胞破碎儀:TL-ST400型,江蘇天翎儀器有限公司;高速多功能粉碎機:RHP-2000A型,天津榮浩機電設(shè)備有限公司;數(shù)顯恒溫水浴鍋:HH-4型,上海樹立儀器儀表有限公司;高速離心機:TCL-16型,常州金壇良友儀器有限公司;粗脂肪測定儀:SZF-06A型,上海洪紀(jì)儀器設(shè)備有限公司;電熱鼓風(fēng)干燥箱:DGH-9140A型,上海一恒科學(xué)儀器有限公司。

 

1.3方法

1.3.1桑葚樣品處理將桑葚干樣品烘干至恒重,粉碎,過70目篩后密封保存?zhèn)溆谩#保常裁撝瑓⒄眨牵拢担埃埃梗?/span>—2016并修改。稱取處理好的桑葚樣品4.000g,水浴溫度70℃回流抽提4h,控制每分鐘80滴左右。脫脂后濾掉廢液得桑葚樣品。1.3.3細(xì)胞破碎儀輔助熱水浸提桑葚多糖稱取脫脂后的桑葚樣品1.000g,按料液比1:30(g/mL)加入蒸餾水,65℃恒溫水浴鍋中用細(xì)胞破碎儀輔助浸提,將超聲波細(xì)胞破碎儀變幅桿末端插入液面8mm并使其位于容器中心位置。變幅桿轉(zhuǎn)換開關(guān)打到Φ6,設(shè)置超聲時間1.2s,間歇時間1.5s,用紗布過濾混合物,3500r/min離心10min,收集上清液,65℃水浴濃縮至液體體積為10mL。

1.3.4桑葚多糖的脫蛋白根據(jù)文獻稍作修改:將濃縮后的桑葚樣品置于分液漏斗中,按體積比1:2加入Sevag試劑(V三氯甲烷:V正丁醇=4:1),充分搖勻,靜置,待分液漏斗中液體分層完畢后,除去底層的有機溶劑及中間層的蛋白質(zhì),收集上層液,3500r/min離心10min,除去殘留蛋白質(zhì),收集上清液備用。1.3.5桑葚多糖的制備向脫蛋白后的上清液中加入4倍體積95%乙醇,混勻靜置片刻后沉淀析出,3500r/min離心10min,棄上清,將沉淀放置于蒸發(fā)皿中,65℃干燥1.5h,即為桑葚多糖提取物。